Протокол электрофореза для определения пола ДНК у птиц: Пошаговое руководство

Как провести гендерное тестирование ДНК у птиц с использованием протокола электрофореза?

Гендерное тестирование ДНК птиц — один из самых надежных и неинвазивных методов для заводчиков., исследователи, и любители птиц. Электрофорез является ключевым шагом в подтверждении результатов тестов определения пола птиц на основе ПЦР.. В этом руководстве, мы объясняем подробно, Пошаговый протокол электрофореза для определения пола ДНК птиц.

Что нужно для гендерного тестирования птиц

Прежде чем начать, убедитесь, что у вас есть следующее оборудование и реагенты:

Оборудование:

• Камера для гель-электрофореза и источник питания

• Микропипетки и наконечники

• Лоток для заливки геля и гребни

• Трансиллюминатор УФ или синего света

Реагенты:

• Агарозный порошок (1–2% гель в зависимости от размера фрагмента)

• Буфер TAE или TBE

• пятно ДНК (Этидий бромид, СИБР Сейф, или гель-красный)

• лестница ДНК (стандарт размера)

• ПЦР-продукты (Амплификация гена CHD из ДНК пера или крови)

Шаг 1: Приготовьте агарозный гель

1. Отмерьте 1–2 г порошка агарозы на 100 давай мл (1–2% в зависимости от ожидаемого размера фрагмента ПЦР).

2. Добавьте агарозу в Буфер TAE или TBE в контейнере для микроволновой печи.

3. Нагревать до полного растворения, убедившись, что раствор прозрачный и без частиц.

4. Дайте раствору остыть до ~ 50 ° C, прежде чем добавлять краситель ДНК. (при использовании метода предварительного окрашивания).

5. Вылейте гель в лоток для отливки с установленной гребенкой и дайте ему затвердеть. (около 20–30 минут).

Шаг 2: Подготовьте образцы

1. Смешайте ваш ПЦР-продукт (Амплификация гена ИБС) с загрузочным красителем.

2. Убедитесь, что краситель перемешан равномерно, чтобы отслеживать миграцию..

3. Подготовьте лестницу ДНК в отдельной лунке, чтобы она служила эталоном размера..

Шаг 3: Загрузите гель

1. Осторожно снимите расческу с застывшего геля..

2. Поместите гель в камеру для электрофореза и накройте его буфером..

3. Загрузите образцы ПЦР и лестницу ДНК в отдельные лунки с помощью микропипетки..

4. Запишите позиции образцов, чтобы позже определить результаты мужского и женского пола..

Шаг 4: Запустите электрофорез

1. Подключите камеру к источнику питания.

2. Установите напряжение в соответствии с размером геля. (обычно 5–10 В/см длины геля).

3. Бегите, пока фронт красителя не достигнет 2/3 длины геля (обычно 30–60 минут).

4. Выключите питание и осторожно удалите гель..

Шаг 5: Визуализируйте ДНК

1. Поместите гель на Трансиллюминатор ультрафиолетового или синего света.

2. Наблюдайте полосы ДНК, соответствующие фрагментам гена CHD..

3. Интерпретируйте результаты:

   • Мужские птицы (ZZ): Одна полоса, соответствующая фрагменту CHD-Z..

   • Женщины -птицы (ЗВ): Две полосы, соответствующие фрагментам CHD-Z и CHD-W..

Примечание: Размеры полос незначительно различаются в зависимости от вида и используемых праймеров., но эта закономерность свойственна большинству птиц.

Советы по получению надежных результатов гендерного тестирования птиц

• Используйте свежие продукты ПЦР для электрофореза..

• Избегайте образования пузырьков при заливке гелей..

• Не перегружайте лунки слишком большим количеством образцов ДНК..

• Используйте лестницу ДНК с диапазоном размеров, аналогичным ожидаемым фрагментам ПЦР..

• Всегда надевайте перчатки и защитные очки при работе с пятнами ДНК..

Заключение

Электрофорез – обязательный этап Определение пола птиц на основе ДНК, обеспечение четкого и наглядного подтверждения результатов ПЦР. Следование этому протоколу позволяет заводчикам, исследователи, и лаборатории для надежного определения пола птиц по перо, кровь, или образец яичной скорлупы.

Правильно выполнено, этот метод точный, воспроизводимый, и неинвазивный, сделать это стандартной практикой в ​​​​программах генетики и разведения птиц..

Ссылки (КАКОЙ стиль)

• Гриффитс, Р., Двойной, М. С., Орр, К., & Доусон, Р. Дж. Г. (1998). ДНК-тест на определение пола большинства птиц. Молекулярная экология, 7(8), 1071–1075.

• Лаборатория естественной генетики птиц. (2020). Протоколы тестирования ДНК пола птиц. Получено из https://www.naturalavianlab.com

The Gel Electrophoresis Process in Bird DNA Sexing

What Happens After PCR Amplification?

After the PCR machine amplifies the CHD gene fragments, the resulting DNA solution is loaded onto an agarose gel. An electric current is applied, causing the negatively charged DNA fragments to migrate through the gel matrix. Smaller fragments travel faster and farther than larger ones — this size-based separation is the principle behind gender determination.

Reading the Gel: ZZ vs. ZW Patterns

The CHD-Z fragment (from the Z chromosome) and CHD-W fragment (from the W chromosome) have slightly different molecular weights due to intron length polymorphisms. When visualized under UV light:

• Мужской (ZZ): A single DNA band — only the CHD-Z fragment is present
• Женский (ЗВ): Two distinct DNA bands — both CHD-Z and CHD-W fragments

Our lab uses 2% agarose gels with ethidium bromide staining for optimal band resolution and runs a DNA ladder (size marker) in every gel for accurate fragment size verification.

Quality Control in Electrophoresis-Based Sexing

Preventing False Results

Every gel run at SENO Biotech includes:

• Positive controls: Known male and known female samples to verify band patterns
• Negative controls: No-template controls to detect contamination
• лестница ДНК: 100 bp molecular weight marker for fragment size reference
• Duplicate runs: Ambiguous results are automatically re-run on a fresh gel

When Electrophoresis Isn’t Enough

In approximately 2-3% of cases, particularly with degraded samples or rare species, gel electrophoresis produces faint or ambiguous bands. For these samples, we escalate to capillary electrophoresis или секвенирование генов — higher-resolution techniques that provide definitive results. These escalation tests are performed at no additional charge to ensure every client receives a conclusive answer.

RT-PCR vs. Traditional Gel Electrophoresis

SENO Biotech offers both methods, selecting the optimal protocol based on sample volume, разновидность, and client requirements.